Բջջային կուլտուրաների աղտոտվածությունը արդյունավետորեն կրճատվել է

Բջջային կուլտուրաների աղտոտումը հեշտությամբ կարող է դառնալ բջջային կուլտուրայի լաբորատորիաների ամենատարածված խնդիրը՝ երբեմն առաջացնելով շատ լուրջ հետևանքներ:Բջջային կուլտուրաների աղտոտիչները կարելի է բաժանել երկու կատեգորիայի՝ քիմիական աղտոտիչներ, ինչպիսիք են միջինը, շիճուկը և ջրի կեղտը, էնդոտոքսինները, պլաստիկացնողները և լվացող միջոցները, և կենսաբանական աղտոտիչներ, ինչպիսիք են բակտերիաները, բորբոսները, խմորիչները, վիրուսները, միկոպլազմայի խաչաձեւ վարակը:Աղտոտված է այլ բջջային գծերով:Թեև անհնար է ամբողջությամբ վերացնել աղտոտումը, դրա հաճախականությունը և ծանրությունը կարող են կրճատվել՝ մանրակրկիտ հասկանալով դրա աղբյուրը և հետևելով լավ ասեպտիկ մեթոդներին:

1. Այս բաժինը նախանշում է կենսաբանական աղտոտման հիմնական տեսակները.
Բակտերիալ աղտոտվածություն
Բորբոս և վիրուսային վարակ
Միկոպլազմայով վարակվածություն
Խմորիչով աղտոտվածություն

1.1 Բակտերիալ աղտոտվածություն
Բակտերիաները ամենուր տարածված միաբջիջ միկրոօրգանիզմների մեծ խումբ են:Դրանք սովորաբար ընդամենը մի քանի միկրոն են տրամագծով և կարող են ունենալ տարբեր ձևեր՝ գնդերից մինչև ձողեր և պարույրներ:Իրենց ամենուր տարածվածության, չափի և արագ աճի տեմպերի պատճառով բակտերիաները, խմորիչների և բորբոսների հետ միասին, հանդիսանում են բջիջների մշակույթի ամենատարածված կենսաբանական աղտոտիչները:

1.1.1 Բակտերիալ աղտոտվածության հայտնաբերում
Բակտերիալ աղտոտվածությունը հեշտությամբ հայտնաբերվում է մշակույթի տեսողական զննումով վարակվելուց հետո մի քանի օրվա ընթացքում.
Վարակված մշակույթները սովորաբար հայտնվում են ամպամած (այսինքն՝ պղտոր), երբեմն մակերեսի վրա բարակ թաղանթով:
Հաճախակի են նկատվում նաև կուլտուրայի միջավայրի pH-ի հանկարծակի անկումներ:
Ցածր էներգիայի մանրադիտակի տակ բակտերիաները հայտնվում են որպես փոքրիկ, շարժվող հատիկներ բջիջների միջև, և բարձր հզորության մանրադիտակի տակ դիտումը կարող է որոշել առանձին բակտերիաների ձևերը:

1.2 Բորբոսը և վիրուսային վարակը
1.2.1 Կաղապարային աղտոտում
Բորբոսը սնկային թագավորության էուկարիոտ միկրոօրգանիզմներ են, որոնք աճում են բազմաբջիջ թելերի տեսքով, որոնք կոչվում են հիֆեր:Այս բազմաբջիջ թելերի միացնող ցանցերը պարունակում են գենետիկորեն նույնական միջուկներ, որոնք կոչվում են գաղութներ կամ միցելիում:

Խմորիչով աղտոտվածության նման, կուլտուրայի pH-ը մնում է կայուն աղտոտման սկզբնական փուլում, այնուհետև արագորեն աճում է, քանի որ մշակույթն ավելի խիստ վարակվում է և դառնում պղտոր:Մանրադիտակի տակ միցելիումը սովորաբար թելիկ է, երբեմն սպորների խիտ կլաստերների տեսքով։Բազմաթիվ բորբոսների սպորները կարող են գոյատևել ծայրահեղ կոշտ և անհյուրընկալ միջավայրերում իրենց քնած փուլում և ակտիվանում են միայն այն ժամանակ, երբ բախվում են աճի ճիշտ պայմանները:

1.2.2 Վիրուսային վարակ
Վիրուսները միկրոսկոպիկ վարակիչ նյութեր են, որոնք տիրում են հյուրընկալող բջիջի վերարտադրության մեխանիզմին:Նրանց չափազանց փոքր չափերը դժվարացնում են դրանք հայտնաբերելը կուլտուրայում և հեռացնել բջիջների կուլտուրայի լաբորատորիաներում օգտագործվող ռեակտիվներից:Քանի որ վիրուսների մեծամասնությունը շատ խիստ պահանջներ ունի իրենց հյուրընկալողների նկատմամբ, դրանք սովորաբար բացասաբար չեն ազդում հյուրընկալողից այլ տեսակների բջիջների վրա:
Այնուամենայնիվ, վիրուսով վարակված բջջային կուլտուրաների օգտագործումը կարող է լուրջ վտանգ ներկայացնել լաբորատոր անձնակազմի առողջության համար, հատկապես, եթե լաբորատորիայում աճեցվում են մարդու կամ պրիմատների բջիջները:

Բջջային կուլտուրաներում վիրուսային վարակը կարող է հայտնաբերվել էլեկտրոնային մանրադիտակով, իմունագոյացման միջոցով մի շարք հակամարմիններ, ELISA կամ PCR համապատասխան վիրուսային պրայմերներով:

1.3 Միկոպլազմայով վարակվածություն
Միկոպլազմաները պարզ բակտերիաներ են՝ առանց բջջային պատերի, և համարվում է, որ դրանք ամենափոքր ինքնարտադրվող օրգանիզմներն են:Իր չափազանց փոքր չափի պատճառով (սովորաբար 1 մկմ-ից պակաս) միկոպլազման դժվար է հայտնաբերել, քանի դեռ դրանք չեն հասել չափազանց բարձր խտության և առաջացնել բջիջների կուլտուրաների վատթարացում;Մինչ այդ, սովորաբար վարակի ակնհայտ նշան չկա:

1.3.1 Միկոպլազմայով վարակվածության հայտնաբերում
Որոշ դանդաղ աճող միկոպլազմաներ կարող են պահպանվել մշակույթներում՝ չառաջացնելով բջիջների մահ, սակայն դրանք փոխում են մշակույթներում հյուրընկալող բջիջների վարքը և նյութափոխանակությունը:

Քրոնիկ միկոպլազմայի վարակը կարող է բնութագրվել բջիջների տարածման նվազեցված արագությամբ, հագեցվածության խտության նվազմամբ և կասեցման մշակույթում ագլյուտինացիայով:
Այնուամենայնիվ, միկոպլազմայով աղտոտվածությունը հայտնաբերելու միակ հուսալի միջոցը կուլտուրան պարբերաբար ստուգելն է՝ օգտագործելով լյումինեսցենտային ներկում (օրինակ՝ Hoechst 33258), ELISA, PCR, իմունագոյացում, ավտոռադիոգրաֆիա կամ մանրէաբանական թեստ:

1.4 Խմորիչով աղտոտվածություն
Խմորիչները սնկային թագավորության միաբջիջ էուկարիոտներ են, որոնց չափերը տատանվում են մի քանի միկրոնից (սովորաբար) մինչև 40 միկրոն (հազվադեպ):

1.4.1 Խմորիչով աղտոտվածության հայտնաբերում
Ինչպես բակտերիալ աղտոտման դեպքում, խմորիչով աղտոտված մշակույթները կարող են պղտորվել, հատկապես, եթե աղտոտումը առաջադեմ փուլում է:Խմորիչով աղտոտված կուլտուրաների pH-ը շատ քիչ է փոխվում, քանի դեռ աղտոտումը դառնում է ավելի ուժեղ, այդ փուլում pH-ը սովորաբար մեծանում է:Մանրադիտակի տակ խմորիչը հայտնվում է որպես առանձին ձվաձև կամ գնդաձև մասնիկներ և կարող է արտադրել ավելի փոքր մասնիկներ:

2.Խաչ վարակ
Թեև ոչ այնքան տարածված, որքան մանրէաբանական աղտոտումը, շատ բջջային գծերի լայնածավալ խաչաձև աղտոտումը HeLa-ով և արագ աճող այլ բջջային գծերով հստակ սահմանված խնդիր է՝ լուրջ հետևանքներով:Ձեռք բերեք բջջային գծեր հեղինակավոր բջջային բանկերից, պարբերաբար ստուգեք բջջային գծերի բնութագրերը և օգտագործեք լավ ասեպտիկ տեխնիկա:Այս գործելակերպը կօգնի ձեզ խուսափել խաչաձեւ աղտոտումից:ԴՆԹ-ի մատնահետքերը, կարիոտիպավորումը և իզոտիպավորումը կարող են հաստատել, թե արդյոք ձեր բջիջների մշակույթում կա խաչաձև աղտոտվածություն:

Թեև ոչ այնքան տարածված, որքան մանրէաբանական աղտոտումը, շատ բջջային գծերի լայնածավալ խաչաձև աղտոտումը HeLa-ով և արագ աճող այլ բջջային գծերով հստակ սահմանված խնդիր է՝ լուրջ հետևանքներով:Ձեռք բերեք բջջային գծեր հեղինակավոր բջջային բանկերից, պարբերաբար ստուգեք բջջային գծերի բնութագրերը և օգտագործեք լավ ասեպտիկ տեխնիկա:Այս գործելակերպը կօգնի ձեզ խուսափել խաչաձեւ աղտոտումից:ԴՆԹ-ի մատնահետքերը, կարիոտիպավորումը և իզոտիպավորումը կարող են հաստատել, թե արդյոք ձեր բջիջների մշակույթում կա խաչաձև աղտոտվածություն: